Blog 75 : ดูคลิปวิดีโอเรื่อง LAMP: https://www.youtube.com/watch?v=UJE9SBMrh20 และอธิบาย Table 1 / Figure 1 ใน proceeding อาจารย์สายศิริ
Primers ที่ใช้มีจําานวน 4 เส้นจะถูกออกแบบให้จําเพาะกับยีน เป้าหมาย ท้ัง 6 ตําแหน่งคือตําาแหน่ง F1, F2, F3, B1, B2 และ B3
ขั้นตอน Starting Structure producing step
ขั้นตอนที่ 1 ที่อุณหภูมิ ประมาณ 65 องศาเซลเซียส ดีเอ็นเอสายคู่จะอยู่ในสภาวะ dynamic equilibrium คือมีการจับกันแบบสายคู่ และคลายเกลียบางส่วนเป็นสายเดี่ยว
ขั้นตอนที่ 2 มีการสร้าง ดีเอ็นเอ สายใหม่ขึ้น
ขั้นตอนที่ 3 ต่อมา F3 Primer จะเข้าไปจับ
ขั้นตอนที่ 4 F3 Primer เริ่มสร้าง ดีเอ็นเอ สายใหม่โดยอาศัยคุณสมบัติของ DNA polymerase with strand displacement ได้DNAที่มีลักษณะเหมือน template
ขั้นตอนที่ 5 ขณะเดียวกันจะปลดปล่อยสายที่ 1 ออกมาเป็น single strand
ขั้นตอนที่ 6 ด้านปลาย 5’ ของสายที่1 จะเป็นส่วนของ F1c (ปลายของ FIP) สามารถเข้าจับกับ F1 สร้าง loop ขึ้นทางด้าน Forward จากนั้น BIP primer จะเข้าจับ และสร้างดีเอ็นเอ สายที่2 ขึ้นมา
ขั้นตอนที่ 7 ในขณะเดียวกันนั้น B3 Primer จะเข้าไปจับ และเริ่มสร้าง DNA สายใหม่
ขั้นตอนที่ 8 จะปลดปล่อยสายที่2 ออกมาเป็น single strand ขณะนี้ที่เป็นปลายด้าน forward จะเป็น F1 ซึ่งจะสร้าง loop โดยจับกับ F1c ทำนองเดียวกันด้าน backward จะเป็น B1c ซึ่งจะสร้าง loop โดยจับกับ B1 ทำให้ได้ stem loop ที่มีรูปคล้าย dumbbell shape เพื่อใช้ในขั้นตอน LAMP cycling
ขั้นตอน cycle amplification step
สามารถเกิด cycle amplification step ด้านปลายของ loop forward ก่อน คือสามารถมี self primed strand displacement DNA synthesis สร้าง DNA จาก F1 ต่อไป เรื่อยๆ จนถึง B1c ขณะเดียวกัน FIP primer ก็สามารถ hybridize กับ F2c ท่ี loop forward และสร้าง DNA สายใหม่ได้เป็น 3 copies และมี stem loop แบบ dumbbell ที่สามารถ เกิด cycle amplification ด้าน backward ขึ้นได้
ดังนั้น การทํางานจะต่อเนื่องกันตลอดเวลา วนเวียนกันอยู่ทําให้ได้ target DNA ที่ยาวขึ้นหลายๆ copies ทําให้อัตราการสร้าง DNA ย่ิงมาก ขึ้น พบว่าสามารถสร้างได้ 109-1010 copies ภายในเวลา 15-60 นาที
แหล่งที่มา : https://www.youtube.com/watch?v=UJE9SBMrh20
Time 22 นาที (09/09/2022)
หอยทาก
โฆษณา
- ดาวน์โหลดแอปพลิเคชัน
- © 2025 Blockdit
